关岭牛MyoD I基因启动子真核表达载体的构建及其在小鼠C2C12细胞中的表达

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.05.006

畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (5): 719-727.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.05.006

关岭牛MyoD I基因启动子真核表达载体的构建及其在小鼠C2C12细胞中的表达

桓聪聪^1，2，许厚强^2*，陈伟^1，2，陈祥²，赵佳福²，张雯²，周迪²，夏丹²

（1.贵州大学生命科学学院，贵阳 550025；2.贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室/贵州大学动物科学学院/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室，贵阳 550025）

收稿日期:2014-07-28 出版日期:2015-05-23 发布日期:2015-05-23
通讯作者: 许厚强，博士，教授，主要从事细胞分子生物学研究，E-mail：houqiang0524@yahoo.com
作者简介:桓聪聪（1989-），女，河南许昌人，硕士生，主要从事细胞分子生物学研究，E-mail: huancongcong@126.com
基金资助:
转基因生物新品种培育重大专项 (2013ZX08009-004)；黔科合重大专项(字［2013］6008号)；贵州省科技厅农业攻关项目(黔科合NY字［2012］3008号)；贵州大学研究生创新基金(研农2014021)

Construction of MyoD I Promoter Eukaryotic Expression Vector in Guanling Cattle and Its Expression in Mouse C2C12 Cells

HUAN Cong-cong^1，2，XU Hou-qiang^2* ，CHEN Wei^1，2，CHEN Xiang²，ZHAO Jia-fu²，ZHANG Wen²，ZHOU Di²，XIA Dan²

（1.College of Life Science，Guizhou University，Guiyang 550025，China；2.Key Laboratory of Animal Genetics，Breeding and Reproduction in the Plateau Mountainous Region of Ministry of Education，College of Animal Science，Guizhou University/Guizhou Key Laboratory of Animal Genetics，Breeding and Reproduction，Guiyang 550025，China）

Received:2014-07-28 Online:2015-05-23 Published:2015-05-23

摘要/Abstract

摘要：

本研究旨在探究关岭牛4个不同长度的MyoD I启动子的启动活性，初步确定该基因核心启动子位置。采用实时荧光定量PCR技术对关岭牛不同组织中MyoD I基因的相对表达量进行检测。以关岭牛血液DNA为模板，设计5'端加磷的引物，PCR扩增获得4个不同长度的关岭牛MyoD I启动子，定向精确替换pEGFP-N3载体的CMV启动子区，构建重组真核表达载体pEGFP-N3-MyoD I。利用脂质体法将重组质粒瞬时转染小鼠C2C12细胞，依据小鼠C2C12细胞发光的强弱判断MyoD I启动子的启动活性。结果显示，MyoD I基因在关岭牛肌肉组织中表达量较高；目的片段成功替换pEGFP-N3载体的CMV区；重组质粒能在小鼠C2C12细胞中成功表达，细胞在激发光下发绿色荧光。本研究成功构建了重组真核表达载体pEGFP-N3-MyoD I，4个启动子均具有启动活性，其中P₃启动子在小鼠C2C12细胞中表达量最高，初步推断P₃启动子为该基因的核心启动子。

Abstract:

The aim of this study was to analyze promoter activity of 4 different lengths MyoD I promoters in Guanling cattle and determine preliminarily the position of the core gene promoter.The relative expression quantity was detected in different tissues of Guanling cattle by real-time quantitative PCR.The DNA extracted from Guanling cattle blood was as a template and the phosphorylated 5'end PCR primers was designed to amplify 4 different lengths MyoD I promoters in Guanling cattle，ultimately accurately replaced the CMV region of pEGFP-N3 vector and got eukaryotic expression vector pEGFP-N3-MyoD I.Then the recombinant plasmid was transiently transfected into mouse C2C12 cells by liposome method.The aim was to verify promoter activity of MyoD I promoter by Luminous intensity of mouse C2C12 cells.The expression level of MyoD I gene was the highest in muscle，the fragment was inserted into an expression vector，the recombinant plasmid could be successfully expressed in mouse C2C12 cells with green fluorescence under the excitation light.In this study,eukaryotic expression vector pEGFP-N3-MyoD I is successfully constructed，4 promoters constructed show promoter activity，expression quantity of P₃ promoter is the highest，so P₃ promoter is regarded as the core promoter of MyoD I gene.

中图分类号:

S823
S813.3

桓聪聪，许厚强，陈伟，陈祥，赵佳福，张雯，周迪，夏丹. 关岭牛MyoD I基因启动子真核表达载体的构建及其在小鼠C2C12细胞中的表达[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(5): 719-727.

HUAN Cong-cong，XU Hou-qiang，CHEN Wei，CHEN Xiang，ZHAO Jia-fu，ZHANG Wen，ZHOU Di，XIA Dan. Construction of MyoD I Promoter Eukaryotic Expression Vector in Guanling Cattle and Its Expression in Mouse C2C12 Cells[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2015, 46(5): 719-727.

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Construction of MyoD I Promoter Eukaryotic Expression Vector in Guanling Cattle and Its Expression in Mouse C2C12 Cells

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